体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建
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体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建

Establishing a model of oxidative damage of L02 hepatocytes in vitro

赵辉 孟炜 易述红 陈规划

Zhao Hui, Meng Wei, Yi Shuhong, Chen Guihua

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引用本文:

【摘要】  目的  探讨L02肝细胞氧化损伤模型的构建方法。方法  将L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h组和12 h组,每组再根据加入不同浓度的过氧化氢(H2O2)分为100、200、300、500、750、1 000 μmol/L 6个亚组,对照组不加入H2O2,分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行细胞计数试剂盒(CCK)-8检测。另1组L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h组和12 h组,损伤3 h组再根据加入H2O2浓度不同分为100、200、300、500、750 μmol/L 5个亚组,损伤6 h组分为100、200、300、500 μmol/L 4个亚组,损伤12 h组分为100、200、300 μmol/L 3个亚组,对照组不加入H2O2,分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染流式细胞检测。损伤模型的建立及鉴定:L02肝细胞培养后损伤组加入200 μmol/L H2O2,对照组不加入H2O2。在培养箱中继续孵育6 h后检测细胞线粒体膜电位、丙二醛(MDA)、活性氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)等指标。结果  损伤3 h组中,200、300、500、750、1 000 μmol/L等各亚组的细胞存活率与对照组比较,差异有统计学意义(均为P<0.01);损伤6 h组中,各亚组细胞存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0.01);损伤12 h组中,各亚组存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P <0.01)。3 h H2O2浓度与细胞存活率的相关系数为-0.993,6 h组为-0.955,12 h组为-0.819。Annexin V-FITC /PI双染检测不同浓度、不同作用时间的H2O2损伤情况下细胞凋亡/坏死率:损伤3、6、9 h组中,损伤各亚组与对照组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。3 h H2O2浓度与细胞凋亡或坏死率的相关系数为0.971,6 h组为0.992,12 h组为0.986。200 μmol/L H2O2作用6 h处理L02肝细胞的损伤组与对照组比较,线粒体膜电位、MDA、ROS、SOD、ALT、AST差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论 200 μmol/L H2O2作用6 h处理L02肝细胞是体外模拟缺血再灌注或氧化损伤的良好模型。

关键词: 肝细胞;氧化损伤;缺血-再灌注损伤;凋亡

中图分类号: R617

基金资助: 广东省自然科学基金面上项目(S2012010009333);广州市科技计划项目重大民生公关专项(2001Y1-00033-2);广州市科技计划项目(2010J-E121、2010U1-E00551-1)

作者单位: 中山大学附属第三医院肝胆外科

作者简介: 通讯作者:易述红,Email:yishuhong@163.com

收稿日期: 2016-03-10

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