肝癌相关成纤维细胞对单核细胞来源树突状细胞分化的影响 
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肝癌相关成纤维细胞对单核细胞来源树突状细胞分化的影响

Effects of hepatocellular carcinoma-associated fibroblasts on differentiation of monocyte-derived dendritic cells

程锦涛,张英才,邓宜南,陆慧琼,张琪,杨扬

Cheng Jintao, Zhang Yingcai, Deng Yinan, Lu Huiqiong, Zhang Qi, Yang Yang

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引用本文:

【摘要】  目的  研究肝癌相关成纤维细胞(hCAF)在单核细胞(Mo)来源树突状细胞(DC)分化过程中所起到的作用。方法  采用酶消化法从肝癌组织中分离培养获得人hCAF;采用密度梯度离心法获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),经密度梯度离心及磁珠分离法从健康人外周血浓缩白细胞中获得CD14+Mo。hCAF-CD14+Mo(1∶10)和CD14+Mo细胞在第1日及第4日均加入GM-CSF(20 ng/ml)和IL-4(20 ng/ml),共诱导6 d。两组细胞分为两份,一半加入脂多糖(LPS)200 ng/ml刺激3 d,另一半不加入LPS作为对照。最后细胞共分为4组:hCAF-Mo组、hCAF-Mo++LPS组、不成熟DC(iDC)组及成熟DC(mDC)组。采用倒置荧光显微镜观察4组细胞的形态变化。各组细胞分为两部分,一部分细胞采用流式细胞术检测细胞表面分子CD83、CD80、CD1a的表达情况,另一部分细胞分别与预染CFSE的淋巴细胞共培养5 d,采用流式细胞术检测T淋巴细胞增殖情况。结果  倒置显微镜结果显示在hCAF干扰下Mo不能分化为DC。CD83、CD1a、CD80的表达在iDC组分别为(3.2±0.7)%、(61.7±8.4)%、(30.1±0.9)%,mDC组分别为(80.1±2.8)%、(83.2±6.0)%、(96.1±1.9)%,hCAF-Mo组分别为(1.6±0.9)%、(1.8±0.9)%、(16.0±3.2)%,hCAF-Mo+LPS组分别为(9.0±1.2)%、(1.1±0.4)%、(58.4±3.6)%。hCAF-Mo组与iDC组的CD1a、CD80表达差异均有统计学意义(均为P<0.01)。iDC组的CD83表达极低,因此hCAF-Mo组与iDC组的CD83表达差异没有统计学意义(P>0.05)。hCAF-Mo+LPS组与mDC组的3种表型表达差异均有统计学意义(均为P<0.01)。iDC组的T淋巴细胞增殖率为(3.3±0.9)%,mDC组为(34.5±7.3)%,hCAF-Mo组为(5.3±1.2)%,hCAF-Mo+LPS组为(7.0±1.2)%。与iDC组相比,mDC组能有效地刺激T淋巴细胞增殖。hCAF-Mo组和hCAF-Mo+LPS组刺激T淋巴细胞增殖的能力均较弱,与mDC组相比差异有统计学意义(均为P<0.01)。结论 hCAF可明显抑制Mo分化成DC,在肝癌的免疫逃逸过程中发挥重要的作用。

关键词: 癌,肝细胞;肝癌相关成纤维细胞;树突状细胞;免疫逃逸

中图分类号: R617

基金资助: 国家自然科学基金 (81170452、81170451、81300365、81370575);广东省自然科学基金(9251008901000020);广东省科技计划基金(2010B050700003、2011B031800103);广州市科技计划重点项目(2011Y1-00033)

作者单位: 中山大学附属第三医院肝移植中心 中山大学器官移植研究所 广东省器官移植研究中心(程锦涛、张英才、邓宜南、张琪、杨扬);中心实验室(陆慧琼)

作者简介: 通讯作者:杨扬,Email:yysysu@163.com

收稿日期: 2016-03-11

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