不同冻存条件对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响 


















	

首页>当期快报>2013年第4卷第5期  实验研究 字号 收藏本页
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不同冻存条件对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

Influence of different freezing conditions on biological characteristics of human umbilical cord mesenchymal stem cells

李田,李小毛,陈少宏,许成芳,张琪

LI Tian*, LI Xiao-mao, CHEN Shao-hong, XU Cheng-fang, ZHANG Qi

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引用本文:

【摘要】  目的  观察不同冻存液对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell, hUC-MSC)冻存复苏后生物学特性的影响,优化冻存方法。方法  脐带取自2011年1月至2011年12月在中山大学附属第三医院产科剖宫产的足月健康产妇。从脐带分离得到的hUC-MSC培养传代,取第3代细胞。根据冻存液不同分为3组,A组冻存液为二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)︰胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)︰低糖杜氏培养基(low glucose Dulbecco's modified Eagle's medium,LG-DMEM)为1︰2︰7,B组为DMSO︰FBS︰LG-DMEM为1:5:4,C组为DMSO︰FBS为1︰9,不含LG-DMEM。经冻存12个月,复苏细胞,以第3代未冻存细胞悬液作为对照组,采用台盼蓝染色法比较hUC-MSC的细胞存活率,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法比较细胞的生长情况绘制生长曲线,倒置显微镜下观察细胞的生长状况,采用流式细胞仪检测各组细胞的表面标记。结果  A、B、C三组的细胞存活率分别为(20±4)%、(71±8)%和(85±7)%。与C组比较,A组和B组的细胞存活率降低,差异有统计学意义(均为P<0.05)。细胞生长曲线显示,与对照组相比,C组hUC-MSC在各时间点细胞生长迅速,但差异无统计学意义(P>0.05);B组hUC-MSC在24 h、48 h、72 h细胞生长差异无统计学意义(P>0.05),在96 h时间点生长速率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而A组hUC-MSC在各个时间点细胞生长减慢,差异有统计学意义(均为P<0.05)。形态学观察显示,A组细胞胞体宽大多角,并且较多分支,B组和C组细胞饱满,折光性好,呈长梭形、纺锤形或多角形。A组细胞复苏后细胞数目过少无法进行表面标记,B组和C组hUC-MSC表面标记物CD31、CD34、CD45、HLA-DR表达阴性,CD105、CD90、CD44表达阳性。结论  含高浓度血清的冻存液适合hUC-MSC的长期保存,含90%FBS的冻存液为hUC-MSC的最佳冻存保护液。

关键词: 间充质干细胞;脐带;冷冻保存;复苏

中图分类号: R617

基金资助: 广东省科技计划项目(2008B030301061)

作者单位: 中山大学附属第三医院妇产科(李田、李小毛、许成芳);肝移植中心(陈少宏、张琪)

作者简介: 通讯作者:李田,Email:sandy_litian@21cn.com

收稿日期: 2016-03-28

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