小鼠肾脏缺血-再灌注损伤miRNAs差异表达谱研究
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小鼠肾脏缺血-再灌注损伤miRNAs差异表达谱研究

吴奥 王水良 祝玲 杨顺良

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目的 筛选小鼠肾脏缺血-再灌注损伤(IRI)差异性表达的微小核糖核酸(miRNAs),为进一步深入阐明肾脏IRI发生、发展的分子机制奠定基础。方法 应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉制备急性肾缺血损伤模型,将15只小鼠分为IRI组和假手术组(E组),IRI组再分为A组(缺血时间45 min,再灌注时间24 h)、B组(缺血时间25 min,再灌注时间24 h)、C组(缺血时间45 min,再灌注时间4 h)、D组(缺血时间25 min,再灌注时间4 h),每组3只。采用肾脏组织形态学改变和肾功能评估结果来鉴定各组小鼠的IRI程度;采用miRNAs芯片聚类分析对小鼠IRI特定缺血时间(25、45 min)和再灌注时间(4、24 h)下肾脏差异性表达差异表达的miRNAs进行筛选鉴定;采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)对小鼠IRI后差异表达miRNAs芯片miR-695与miR-145进行验证。结果 肾脏组织形态学改变和肾功能评估结果显示成功建立IRI模型。与假手术组相比,肾脏IRI组共检出71种差异性表达显著的miRNAs,其中30种下调表达,41种上调表达。qRT-PCR法检测结果表明,以E组特定miRNAs的表达量标准化为1,miR-695及miR-145在肾脏IRI组的相对表达量分别为11.82和0.31(均为P<0.05),与芯片结果基本一致。结论 肾脏IRI后,miRNAs表达谱发生差异性改变,这些差异性表达的miRNAs将可作为肾脏IRI的分子标志物而具有潜在的临床及科研应用价值。

关键词: 肾组织;肾动脉夹闭;缺血-再灌注损伤;微小核糖核酸(miRNAs);芯片;miR-695;miR-145;基因差异表达谱;实时定量逆转录-聚合酶链反应

中图分类号: R617 R-332

基金资助: 福建省科技厅引导性项目(2015Y5007)

作者单位: 350025 福州,解放军福州总医院泌尿外科 全军器官移植研究所 厦门大学附属东方医院(吴奥、王水良、祝玲、杨顺良);武汉市第九人民医院泌尿外科(吴奥)

作者简介:

收稿日期: 2017-03-31

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