人血清中非Gal异种抗体检测方法的探讨
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人血清中非Gal异种抗体检测方法的探讨

叶学军 卢希彬 潘登科 蔡志明 牟丽莎 赵成江

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目的 探讨人血清中抗非半乳糖(Gal)异种抗原抗体的最佳检测条件。方法 选用α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪的外周血单核细胞(PBMC)作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度(4.8%、16.7%、100%)和孵育时间(0.5、1.0、2.0、3.0、6.0 h)条件下,利用流式细胞仪检测GTKO猪的PBMC上结合IgM和IgG的水平。结果 在16.7%血清浓度下,孵育时间从0.5 h延长至3.0 h,能显著提高非Gal IgM结合PBMC的水平(P<0.01),而IgG水平的提高则差异无统计学意义(P>0.05)。提高血清浓度也可提高非Gal IgM的结合水平,采用100%的血清浓度孵育3 h,IgM结合PBMC水平最高且有统计学意义(P<0.01)。采用100%的血清孵育6 h,IgG结合水平升高有统计学意义(P<0.05)。延长孵育时间和提高血清浓度不会影响PBMC的活力。结论 检测人血清中抗非Gal异种抗原抗体的最佳条件为每1×105个猪PBMC,采用100%人血清浓度孵育3 h检测IgM水平,或加100%人血清浓度孵育6 h检测IgG水平。这一条件的优化有助于筛选非Gal表达抗原低表达的供体猪。

关键词: 异种移植;外周血单核细胞;非Gal抗原;流式细胞术;IgM/IgG;α-1,3半乳糖基转移酶;基因敲除;五指山小型猪

中图分类号: R-332 R617

基金资助: 深圳市高水平医学学科建设专项基金(2016031638);深圳市三名工程深圳市科创委学科布局项目(JCYJ20160229204849975);深圳市科创委企业工程中心项目(GCZX2015043017281705);深圳市卫计委临床技术研究与转化类(201501018)

作者单位: 518035 深圳市第二人民医院(叶学军、蔡志明、牟丽莎、赵成江);南方科技大学(卢希彬);中国农业科学院北京畜牧兽医研究所(潘登科);中山大学(蔡志明、牟丽莎、赵成江)

作者简介:

收稿日期: 2017-03-31

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